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产志贺毒素致泻大肠埃希氏菌及其多重PCR检测技术---美国杜邦2014年网络讲堂
2014年11月25日

大肠杆菌(Escherichia coli)是一种革兰氏阴性菌,过氧化氢酶(触酶)试验阳性,氧化酶试验阴性,硝酸还原酶试验阳性,吲哚试验阳性和兼性厌氧的芽孢杆菌,是宿主人和其他恒温动物的天然肠道菌群。

大肠杆菌的血清型十分繁多和复杂,其血清型分类的根本是菌体抗原(O抗原)和鞭毛抗原(H抗原)。已发现的O抗原的类型多达170多种,每一种都被定义为一个单独的血清型 。

某些大肠杆菌可引发人类的肠胃炎和腹泻等疾病,因而被称作致病型大肠杆菌。根据致病机制不同(如感染型或毒素型),可分为产肠毒素大肠杆菌(ETEC), 侵袭性大肠杆菌(EIEC), 弥漫性黏附性大肠杆菌(DAEC),肠集聚性大肠杆菌(AAEC),肠致病性大肠杆菌(EPEC)和肠出血性大肠杆菌(EHEC) 。

1982年美国曾经两次发生了严重肠炎暴发,O157:H7血清型首次被发现,并被认为是疾病暴发的病原菌(Riley et al. 1983)。由于这些菌株能分泌一种与引起痢疾的志贺氏菌分泌的毒素十分相似的毒素,因而被称作产志贺毒素大肠杆菌STEC)。

 

目前发现可引起人类感染的STEC472种血清型,但经常引起人患病的血清型不到10种。

根据血清分型和致病力强弱将STECA到E分成5个型别。A型为致病力最强的血清型:包括O157:H7O157:NMB型为能引起严重疾病和暴发流行,但感染发生率较A型低的血清型,例如:O26:H11O103:H2O111:NMO121:H19O145:NMC型与散发的HUS有关,很少引起暴发流行,包括:O91:H21O113:H21。D型通常只引起人腹泻的散发病例,E型包括其它与人疾病无关的STEC血清型。

STEC感染是动物源性疾病,反刍动物是STEC的自然宿主,其中牛是最重要的宿主。

人感染STEC通常经过进食生的或未熟的肉类、生牛奶或者生食被污染的蔬菜水果而发病,也有在屠宰牲畜和生肉加工时被感染。有研究表明,低于100 cfuSTEC就能引起人致病,因此直接接触患者也可引起继发感染。

世界各国的检出率: 2007-2009年,欧盟各成员国每年检测超过一万份牛肉样本,STEC的检出率为0.3%2.3%,其中O157:H7的检出率为0.1%~0.7%。相比较而言,在蔬菜和水果中的检出率则低很多,分别是STEC 0.19%和O157:H7 0.14%。

在英国、加拿大、新西兰和泰国等STEC检出率为9%~12%。

美国华盛顿州的3份研究中,STEC的检出率分别是1%、17%、23%。

在阿根廷,50份碎牛肉中检出15STEC阳性标本。

在印度,从111份碎牛肉中可查出近50%的样本为STEC PCR阳性。

不同国家甚至一国不同地区的检出率都存在一定差异,有的可能与流行趋势有关,但也存在实验技术方面的原因,比如采样方法的不同、样本数量的大小和样本的选择以及检测技术的不同(到现在还没有统一的STEC特别是非O157 STEC的检测标准),此外很多研究主要关注O157:H7的检测。这些差异造成了各实验室数据很难进行比较研究。

 

BAX® STEC多重实时定量PCR检测法的设计

 

1、 TTR < 1 hour 与现有的大肠杆菌O157:H7检测法保持一致(标准化需要)

2可以在现有BAX平台上运行 Real-time PCR 探针 – Scorpion 引物探针

3BAX®系统STEC检测试剂盒

      Screen(筛查STEC)试剂盒

      Panel I试剂盒(确认E. coli O26, O111, O121

      Panel II试剂盒(确认E. coli O45, O103, O145